兔單抗發展歷史

單克隆抗體是由單一B淋巴細胞分泌得到,但是由于B淋巴細胞在體外不能長期存活,限制了單抗的大量生產。

1975年,Kohler和Milstein成功把免疫小鼠的脾臟B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合,形成的雜交瘤細胞既具有B淋巴細胞分泌單克隆抗體的能力,又具有骨髓瘤細胞在體外培養中無限快速增殖且存活的能力。雜交瘤技術的出現極大的促進了抗體在科研、臨床及治療上的應用(圖1)。

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早期的單克隆抗體均為小鼠單抗,但是小鼠單抗的主要缺陷在于小鼠免疫系統不能識別某些免疫原,尤其是鼠源性的免疫原。兔的抗血清應用于科學研究要遠早于小鼠抗體,其具有更好的親和力和特異性,不過由于缺少兔源性的骨髓細胞瘤,因此難于建立用于生產單抗的雜交瘤細胞株,而兔-鼠異源雜交瘤細胞則不穩定且不能長期分泌抗體。


1995年,Knight通過轉基因技術,將c-myc和v-abl兩個癌基因引入兔子建立轉基因兔,獲得了兔骨髓瘤細胞系240E-1,并成功制造了兔雜交瘤細胞用來生產兔單克隆抗體,但是用240E-1細胞系制備的雜交瘤細胞不穩定且抗體產出量低。



一、兔單抗的優勢

兔單抗用于制備雜交瘤的B淋巴細胞通常取自免疫動物的脾臟,相比于小鼠,兔子的脾臟更大,獲得的B淋巴細胞數量是小鼠的近50倍,因此能夠獲得更多的雜交瘤克隆,有利于需要進行大規??贵w篩選的場景,例如抗體藥物的研發。此外相比于小鼠單抗,兔單抗還具有如下優勢(圖2):


高親和力

抗體和抗原之間的親和力通常用解離系數(Kd)來表示,Kd值越小,解離能力越弱,抗原抗體結合能力越強。大多數單抗的Kd值在納摩爾或亞納摩爾級,而兔單抗可以達到皮摩爾級。高親和力使得兔單抗在開發更靈敏檢測診斷試劑方面具有巨大的應用潛力。


高特異性

兔的免疫系統具有與人和小鼠不同的免疫多樣化和親和成熟機制,兔單抗具有比小鼠單抗更強的結合特異性,能夠識別細微的抗原表位變化。在進行免疫組化實驗時,針對相同的靶蛋白,兔單抗往往能夠獲得更清晰的圖像結果以及更低的染色背景。


可識別更多的表位

兔獨特的免疫系統及其更龐大的B細胞庫,能夠產生更多識別獨特抗原表位的抗體。兔單抗能夠識別更多的抗原,尤其是小鼠抗原,因此兔單抗在應用于小鼠模型時具有更大的潛力。此外,人和小鼠一些蛋白高度保守,導致在以小鼠為宿主時這些蛋白的免疫原性較低。

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二、正能重組兔單抗

通過雜交瘤細胞生產單抗,可能會由于基因突變或丟失,而導致雜交瘤細胞的不穩定甚至退化,重新制備雜交瘤細胞系不僅費時費力,而且與之前的細胞系之間還是存在差異。


與雜交瘤技術不同的是,重組單抗技術從免疫動物獲得B淋巴細胞后,將單個B細胞分選到培養板里,并利用靶抗原從中篩選能分泌高親和力抗體的B細胞,隨后從該B細胞中克隆抗體基因片段,構建到相應的載體骨架中,最后通過細胞表達系統(如CHO表達系統)規?;倪M行單克隆抗體生產與純化(圖3)。


重組單抗由于序列已知并且構建到了表達載體上,因此更加穩定,批間差異更小,具有更高的一致性和可重復性。


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正能生物專注于科研抗體的研發,結合高通量篩選、基因重組和細胞表達技術開發了穩定的重組兔單抗平臺,可以為廣大科研工作者提供高親和力、高特異性和高一致性的重組兔單抗,助力科研工作者獲得理想的實驗結果。


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